2. 將混合氣瓶、氮氣瓶安放平穩(wěn)，并分別裝好減壓閥（含壓力表），安置在適當(dāng)位置；
3. 接上氣路并檢查氣路，為防止漏氣，必要時可在各接管處用密封膠粘合；

使用
（一）操作室厭氧環(huán)境形成：
1. 按使用要求放置好必要的附件和器具，并向操作室內(nèi)放入二個無毒塑料袋； 
2. 通電源開照明燈，開溫控儀，調(diào)節(jié)所需溫度及安全溫度；
3. 操作室內(nèi)放入1000g鈀粒（封閉）和500g干燥劑，并放入美蘭指示劑（封閉）；
4. 關(guān)緊取樣室內(nèi)外門，并抽真空校驗；
5. 操作室內(nèi)*次置換（氮氣置換）：
  A. 先用橡皮管插入操作室內(nèi)進氣口，另一頭插入塑料袋；
  B. 接通氮氣進氣路，打開氮氣控制閥1，使二只塑料袋充足氮氣，關(guān)閉閥門1，然后扎緊袋口；
  C. 把乳膠手套套在觀察板法蘭圈上并扎緊；
  D. 把塑料袋內(nèi)氮氣漸漸放于操作室內(nèi)，至全部放出。
6. 操作室第二次置換（氮氣置換）重復(fù)一次充氮過程，取樣室先抽真空，并注意隨時用腳踏開關(guān)開閉排氣。
7. 操作室第三次置換（混合氣體置換）：（混合氣體配比為N2 85%、H2 10%、CO2 5%）
  A. 調(diào)換氣路打開混合氣閥3進氣，充氣時取樣室先抽真空，并隨時用腳踏開關(guān)開閉排氣；
  B. 混合氣充滿塑料袋后，關(guān)掉混合氣閥并打開閥5，使混合氣經(jīng)過流量計，調(diào)整流量計，流量為每分鐘10ml左右； 
  C. 把塑料袋內(nèi)混合氣漸漸排于操作室內(nèi)；
  D. 通過三次換氣后，操作室內(nèi)氣體含氧量已處于極微量狀態(tài)。
8. 操作室內(nèi)打開粑粒除氧劑，接通除氧催化器電源進行催化除氧，一小時后開美蘭指示劑（美蘭安瓶）觀察其變色情況，不變色為操作室內(nèi)達到厭氧環(huán)境； 
9. 開紫外線滅菌燈，室內(nèi)進行滅菌處理，滅菌時間按具體實驗自定。

（二）菌種的置入和培養(yǎng)： 
1. 檢查取樣室內(nèi)門并關(guān)緊之； 
2. 打開取樣室外門，將菌種放入取樣室后即關(guān)上外門； 
3. 取樣室充氮置換三次過程：打開真空泵，先抽真空度500ml汞柱（66kPa）以上停，然后人工打開氮氣閥2進氣，使指針回復(fù)零位，關(guān)掉閥2。第二次重復(fù)操作一次。第三次操作時，使真空度500ml汞柱（66kPa）以上停，然后打開閥4進混合氣，使指針回復(fù)零位，后掉閥4。取樣室充氮置換三次過程結(jié)束； 
4. 如選定真空度較低就需要增加置換的次數(shù)； 
5. 取樣室內(nèi)外門開啟、關(guān)緊，再抽低真空度100ml汞柱（13kPa）檢驗；
6. 厭氧培養(yǎng)箱需要長期連續(xù)使用的條件： 
  A. 每天在操作室內(nèi)打開美蘭指示劑觀察，如不正常就必須重新?lián)Q氣； 
  B. 要長期連續(xù)輸入微量的混合氣體，使補進的氮氣能和微量的氧結(jié)合通過催化吸收，保證室內(nèi)厭氧狀態(tài)，補入混合氣流量選定為每分鐘10ml左右； 
  C. 連續(xù)培養(yǎng)運行一天，更換一次除氧劑和干燥劑。 
7. 操作室內(nèi)培養(yǎng)室內(nèi)室溫度可任意選擇和控制。 
8. 混合氣瓶、氮氣瓶輸出壓力調(diào)整：調(diào)節(jié)減壓閥，使輸出壓力0.1Mpa左右。

注意事項
1. 儀器盡可能地安裝于空氣清凈、溫度變化較小的地方； 
2. 開機前應(yīng)全面熟悉和了解各組成配套儀器、儀表的使用說明，掌握正確使用方法； 
3. 培養(yǎng)物放入必須是在操作室內(nèi)達到厭氧環(huán)境后放入； 
4. 如發(fā)生故障（停氣等原因）操作室內(nèi)仍可保持12小時厭氧狀態(tài)（超過12小時則根據(jù)需要把培養(yǎng)物取出另作處理）； 
5. 經(jīng)常注意氣路有無漏氣現(xiàn)象；
6. 調(diào)換氣瓶時，注意要扎緊氣管，避免流入含氧氣體； 
7. 真空泵按要求使用，定期檢查加油。